Sobreexpresión de la tetraspanina CD9-GFP como estrategia de seguimiento y caracterización de vesículas extracelulares derivadas de células humanas

Resumen

Las vesículas extracelulares (EV) son nanoestructuras cruciales en la comunicación celular y su estudio es de gran interés en la investigación biomédica. En este estudio se desarrolló una metodología para caracterizar las vesículas extracelulares mediante la sobreexpresión de la tetraspanina CD9 fusionada con la proteína verde fluorescente (GFP) en fibroblastos humanos MRC-5. La eficiencia de la transducción lentiviral en las células MRC-5 superó el 95 %, lo que aseguró una alta expresión de CD9-GFP. La localización perinuclear de CD9-GFP sugiere su participación en la formación de EV y cuerpos multivesiculares (MVB). La cuantificación de transcritos de CD9 y ALIX confirmó un aumento en la fluorescencia de las EV, lo que permitió su identificación y caracterización con citometría de flujo. Esta metodología facilita el seguimiento y la caracterización reproducible de EV humanas. Además, la expresión constitutiva de CD9-GFP reduce el ruido de fondo en las mediciones y simplifica la inmunocaptura de EV, potencialmente elimina la necesidad de un segundo anticuerpo para su visualización. En resumen, este estudio sienta las bases para investigaciones futuras sobre el papel de CD9 en la biogénesis de EV y su aplicabilidad en la investigación biomédica, lo que ofrece una herramienta valiosa para el estudio de estas nanoestructuras esenciales en la comunicación celular.